Hver er styrkur G418 fyrir 293T frumuskimun? Hvað ætti að huga að meðan á aðgerðinni stendur?

1. Vinnuregla G418 skimunar 293T frumna
G418 er neomycin sýklalyf sem truflar myndun innanfrumu próteina og veldur þar með frumudauða. Hins vegar geta frumur með neomycin ónæmisgenið framleitt ónæmisprótein til að standast eiturverkanir G418. Þess vegna, í ræktunarmiðli sem inniheldur G418, geta aðeins frumur með neómýsínónæmisgenið lifað og vaxið.

2. Áhrif G418 styrks á 293T frumur
Áhrif G418 styrks á 293T frumur eru margþætt, þar á meðal frumuvöxtur, lífvænleiki frumna, formgerð frumna og frumuþol. Sértæk áhrif G418 styrks á 293T frumur koma aðallega fram í eftirfarandi þáttum:
1. Frumuvöxtur: Við lægri G418 styrk (eins og 0.25 mg/ml) geta 293T frumur vaxið eðlilega, frumuþéttleiki eykst smám saman og formgerðin helst góð. Með aukningu á styrk G418 (eins og 0,5 mg/ml) fer að hægja á frumuvexti og frumuþéttleiki eykst hægt. Þegar styrkur G418 nær 1 mg/ml byrja sumar frumur að deyja og frumuþéttleiki minnkar verulega. Ef haldið er áfram að auka styrk G418 (svo sem 2 mg/ml), er frumudauði alvarlegri og frumuþéttleiki minnkar. 2. Frumulífvænleiki: Því hærra sem styrkur G418 er, því minni lífvænleiki frumunnar. Við lágan styrk af G418 (eins og 0.25 mg/ml) er lífvænleiki frumna mikil, frumuformið er fullt og litunin er einsleit. Þegar styrkur G418 eykst minnkar lífvænleiki frumna smám saman, formgerð frumna verður óregluleg og litun er ójöfn. Við háan styrk af G418 (svo sem 2 mg/ml) er lífvænleiki frumna lágt, frumugerð er alvarlega skemmd og litun óeðlileg.
3. Frumugerð: Því hærra sem styrkur G418 er, því óreglulegri er frumugerð. Við lágan styrk af G418 er frumuformið þykkt, snældalaga eða flatt. Þegar styrkur G418 eykst verður frumuformið óreglulegt, frumurúmmálið minnkar og frumubrúnirnar eru óljósar. Við háan styrk af G418 er frumuformið mikið skemmt, frumulíkaminn er afar lítill og frumubrúnirnar eru brotnar.
4. Frumuviðnám: Því hærri sem styrkur G418 er, því sterkari er frumuviðnám. Við lágan styrk af G418 eru frumur næmari fyrir G418 og hætta á frumudauða. Þegar styrkur G418 eykst, þróa frumur smám saman viðnám og lifunartíðni frumna eykst. Við háan styrk G418 nær frumuviðnám hámarki og frumur geta staðist eiturverkanir af háum styrk G418.
Því fyrir 293T frumur er skimunarstyrkur G418 venjulega á milli 1-2 mg/ml. Hægt er að stilla þennan styrk í samræmi við tilraunakröfur. Almennt talað, því meiri skimunarstyrkur, því betri eru skimunaráhrifin, en það mun einnig valda ákveðnum skemmdum á frumunum. Þess vegna, þegar skimunarstyrkur er valinn, er nauðsynlegt að vega tilraunatilgang og frumuþol. Í raunverulegri notkun geturðu byrjað með lægri styrk, eins og 0,5 mg/ml, fylgst með frumuvextinum og aukið styrkinn smám saman þar til þú finnur viðeigandi skimunarstyrk.